Nitrochinolin als orales antibakterielles Medikament zur Behandlung von Harnwegsinfektionen

Mittels spektrophotometrischer Fluoreszenzanalyse kann Nitroxolin den Abbau von extrazellulärem DQ-Kollagen IV in allen getesteten Krebszelllinien signifikant reduzieren. Nitroxolin kann die Echtzeitüberwachung der Tumorzellinvasion deutlich reduzieren und das invasive Wachstum multizellulärer Tumorsphäroide verringern, die als dreidimensionales Glaskörpermodell der Tumorinvasion dienen können. In In-vitro-Angiogenese-Experimenten kann Nitroxolin die Bildung von Endothelröhren signifikant reduzieren.

Nitroxolin hemmte das Tumorwachstum, die Angiogenese und die Metastasierung in Mausmodellen mit LPB-Fibrosarkom und MMTV-PyMT-Brustkrebs signifikant.

In-vitro-Kinase-Assays: Die Wirksamkeit von SP600125 gegenüber Kinasen, einschließlich MPS1, JNK und Aurora-Kinase A, wird anhand der spezifischen Messung des radioaktiven Phosphotransfers zum Substrat bestimmt. Für jedes Enzym werden zunächst die absoluten Km-Werte für ATP und das spezifische Substrat bestimmt und jeder Assay dann bei optimierten Konzentrationen von [ATP] (2·αKm) und [Substrat] (5·Km) durchgeführt. Die MPS1-Aktivität wird mit 5 nM rekombinantem MPS1-Protein in 50 mM HEPES pH 7,5, 2,5 mM MgCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM DTT, 3 μM NaVO3, 2 mM β-Glycerophosphat, 0,2 mg/ml BSA, 200 μM P38-βtid-Substratpeptid (KRQADEEMTGYVATRWYRAE) und 8 μM ATP mit 1,5 nM 33P-γ-ATP gemessen. Zehn serielle 1:3-Verdünnungen (von 30 μM bis 1,5 nM) von SP600125 werden getestet und IC50 bestimmt.

Zellsuspensionen werden gemäß den Anweisungen des Herstellers in die Vertiefungen einer E-Platte 16 ausgesät. Nach dem Aussäen wird der CI alle 15 Minuten überwacht. Nach etwa 10 Stunden (MCF-10A neoT und MMTV-PyMT), 14 Stunden (U-87 MG) oder 24 Stunden (LPB), wenn sich die Zellen in ihrer logarithmischen Wachstumsphase befinden, werden 50 μl der Verbindung oder 0,1 % DMSO hinzugefügt und das Experiment 72 Stunden lang laufen gelassen. Alle 24 Stunden wird das Medium durch frisches Medium ersetzt, das den Inhibitor oder eine geeignete Kontrolle enthält, um Zelltod durch Mediummangel zu verhindern. Verbindungen und ihre Konzentrationen sind: Nitroxolin (5 μM) und CA-074 (5 μM) für alle Zelllinien außer der MCF-10A neoT-Zelllinie, bei der 2,5 μM Nitroxolin verwendet wurden. Alle Messungen wurden vierfach durchgeführt. (Nur als Referenz)