Nitroquinolina como fármaco antibacteriano oral para el tratamiento de infecciones del tracto urinario

Mediante un ensayo de fluorescencia espectrofotométrica, la nitroxolina puede reducir significativamente la degradación del colágeno DQ IV extracelular en todas las líneas celulares cancerosas analizadas. La nitroxolina puede reducir significativamente la monitorización en tiempo real de la invasión de células tumorales y disminuir el crecimiento invasivo de esferoides tumorales multicelulares, que pueden utilizarse como modelo vítreo tridimensional de la invasión tumoral. En experimentos de angiogénesis in vitro, la nitroxolina puede reducir significativamente la formación de tubos endoteliales.

La nitroxolina inhibió significativamente el crecimiento tumoral, la angiogénesis y la metástasis en modelos murinos de cáncer de mama con fibrosarcoma LPB y MMTV PyMT.

Ensayos in vitro de quinasas: La potencia de SP600125 frente a quinasas, como MPS1, JNK y Aurora quinasa A, se determina mediante la medición específica de la fosfotransferencia radiactiva al sustrato. Para cada enzima, se determinan inicialmente los valores absolutos de Km para ATP y el sustrato específico, y cada ensayo se ejecuta posteriormente a concentraciones optimizadas de [ATP] (2·αKm) y [sustrato] (5·Km). La actividad de MPS1 se mide utilizando 5 nM de proteína recombinante MPS1 en 50 mM HEPES pH 7,5, 2,5 mM MgCl₂, 1 mM MnCl₂, 1 mM DTT, 3 μM NaVO₃, 2 mM β-glicerofosfato, 0,2 mg/mL BSA, 200 μM P38-βtide sustrato-péptido (KRQADEEMTGYVATRWYRAE) y 8 μM ATP con 1,5 nM 33P-γ-ATP. Se analizan diez diluciones seriadas 1:3 (de 30 μM a 1,5 nM) de SP600125 y se determina la CI₄.

La suspensión celular se siembra en los pocillos de una placa E-16 según las instrucciones del fabricante. Tras la siembra, se monitoriza el CI cada 15 min. Tras unas 10 h (MCF-10A neoT y MMTV-PyMT), 14 h (U-87 MG) o 24 h (LPB), cuando las células se encuentran en su fase logarítmica de crecimiento, se añaden 50 μl del compuesto o DMSO al 0,1 % y se deja que el experimento se desarrolle durante 72 h. Cada 24 h, el medio se sustituye por medio fresco que contiene el inhibidor o un control adecuado para prevenir la muerte celular por depleción del medio. Los compuestos y sus concentraciones son: nitroxolina (5 μM) y CA-074 (5 μM) para todas las líneas celulares excepto la línea MCF-10A neoT, en la que se utilizó nitroxolina a 2,5 μM. Todas las mediciones se realizaron por cuadruplicado. (Solo como referencia).