La nitroquinoléine comme médicament antibactérien oral pour le traitement des infections des voies urinaires

Grâce à un dosage spectrophotométrique de fluorescence, la nitroxoline peut réduire significativement la dégradation du collagène IV extracellulaire DQ dans toutes les lignées cellulaires cancéreuses testées. Elle peut réduire significativement la surveillance en temps réel de l'invasion des cellules tumorales et ralentir la croissance invasive des sphéroïdes tumoraux multicellulaires, qui peuvent servir de modèle vitreux tridimensionnel d'invasion tumorale. Des expériences d'angiogenèse in vitro ont montré que la nitroxoline peut réduire significativement la formation de tubes endothéliaux.

La nitroxoline a inhibé de manière significative la croissance tumorale, l'angiogenèse et les métastases dans les modèles murins de fibrosarcome LPB et de cancer du sein MMTV PyMT.

Dosages in vitro des kinases : L'activité du SP600125 vis-à-vis des kinases, notamment MPS1, JNK et Aurora kinase A, est déterminée par la mesure spécifique du phosphotransfert radioactif au substrat. Pour chaque enzyme, les valeurs absolues de Km pour l'ATP et le substrat spécifique sont initialement déterminées, puis chaque dosage est réalisé à des concentrations optimisées d'[ATP] (2·αKm) et de [substrat] (5·Km). L'activité MPS1 est mesurée à l'aide de 5 nM de protéine recombinante MPS1 dans 50 mM d'HEPES pH 7,5, 2,5 mM de MgCl2, 1 mM de MnCl2, 1 mM de DTT, 3 μM de NaVO3, 2 mM de β-glycérophosphate, 0,2 mg/mL de BSA, 200 μM de substrat peptidique P38-βtide (KRQADEEMTGYVATRWYRAE) et 8 μM d'ATP avec 1,5 nM de 33P-γ-ATP. Dix dilutions en série 1:3 (de 30 μM à 1,5 nM) de SP600125 sont testées et la CI50 est déterminée.

Les suspensions cellulaires sont ensemencées dans les puits d'une plaque E-16 conformément aux instructions du fabricant. Après l'ensemencement, l'IC est surveillée toutes les 15 minutes. Après environ 10 h (MCF-10A neoT et MMTV-PyMT), 14 h (U-87 MG) ou 24 h (LPB), lorsque les cellules sont en phase logarithmique de croissance, 50 μl du composé ou 0,1 % de DMSO sont ajoutés, et l'expérience est poursuivie pendant 72 h. Toutes les 24 h, le milieu est remplacé par du milieu frais contenant l'inhibiteur ou un témoin approprié afin de prévenir la mort cellulaire due à l'épuisement du milieu. Les composés et leurs concentrations sont : nitroxoline (5 μM) et CA-074 (5 μM) pour toutes les lignées cellulaires autres que la lignée MCF-10A neoT, où la nitroxoline a été utilisée à 2,5 μM. Toutes les mesures ont été réalisées en quadruple. (Uniquement pour référence)